G蛋白活性检测试剂盒优选企业

小g蛋白是从属于细胞调节因子中的一个超家族。rho家族是小g蛋白中的一个亚家族，它在细胞运动、细胞分裂以及基因转录中发挥主要作用。而本试剂盒中的cdc42就属于rho亚家族中的一种， cdc42参与生理活动过程中其分子结构会呈现出2种相互转换的形式：与gtp结合的激l活状态和与gdp结合的非活性状态。

目前cdc42蛋白活性的检测主要是依据小gtp酶cdc42可以与p21活化激酶pak的p21结合区域pbd结合，使pak活化从而发挥生物学功能，进而间接的进行cdc42活性l功能的监测。然而此方法在检测过程中存在着一定的局限性比如gtp水解成gdp的速度过快以及cdc42-gtp结合蛋白与p21结合区域之间较低的亲和力，导致这种检测方法的重复性较差。

体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的cdc42被激l活，而在体外用gtpγs处理大约有90%的cdc42被激l活。

1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物如果是纯的cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug。

2. 每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。

3. 一个管中加入5ul的100x gtpγs终浓度即为100 um作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp终浓度即为1 mm作为阴性对照。

4. 将离心管置于30°c条件下反应30min并不断搅动。

5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。

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测定原理

neweast biosciences rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的抗rab35 gtp

单克l隆抗l体，用于测量细胞提取物中或体外的活性rab35 gtp水平

gtpγs加载rab35激l活测定。 简而言之，抗活性rab35小鼠单克l隆抗l体将是

与含有rab35-gtp的细胞裂解液一起孵育。 绑定的活动rab35随后将被下拉

蛋白质a / g琼脂糖。 沉淀的活性rab35将通过免l疫印迹分析使用

抗rab35兔多克l隆抗l体。