RALA KIT信息

1. vasp通过调节rab11依赖性tgf-β受体的质膜靶向来促进肝星状细胞的tgf-β活化

    肝l病学第61卷，首1期，第361-374页，2015年1月

2. rab5活性调节glut4分类为-反应性和非-反应性内体室：-抵抗发展的潜在机制。

    内分l泌学。 2014年9月; 1559：3315-28

将裂解液转移到适当大小的试管中，并置于冰上。

如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。 如果发生这种情况，可将裂解液通过27?号注射l器针头3-4次以剪切基因组dna。

通过离心10分钟在4°c下为12,000 x g清除裂解物。

收集上清液并将样品保存在冰上以备立即使用，或速冻并保存在-70°c以便将来使用。

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电泳与转移

1.将15 μl /孔的下拉上清液加到聚丙l烯-凝胶17％中。 而且，建议包含预先染色的mw标准作为步骤3中成功转移的指标。

2.按照制造商的说明执行sds-page。

3.按照制造商的说明将凝胶蛋白转移到pvdf或硝l酸纤维素膜上。

试剂制备

1x assay/lysis buffer：实验前用去离子水将5x的assay/lysis缓冲液稀释成1x的缓冲液，并在使用前加入蛋白酶抑制l剂如1 mm pmsf, 10 μg/ml leupeptin亮肽素，或 10 μg/ml aprotinin抑肽酶。

样品处理

贴壁细胞

1. 培养细胞密度达到大约80%-90%之间直径10 cm培养皿，~107个细胞，并用活性剂或抑制l剂进行处理。

2. 吸去培养基并用冰冷的pbs洗涤两次。

3. 向细胞中加入1x assay/lysis缓冲液每个直径10cm的组织培养皿中加入0.5-1ml。

4. 将培养皿放置于冰上处理10-20分钟。

5. 用细胞刮棒把细胞从培养皿下分离下来。

6. 将细胞裂解物转入合适的管中并放置于冰上。

7. 如果核发生裂解，细胞裂解物可能会变得非常的粘稠并且难以吸取。当这种情况出现时，将细胞裂解物用27?的注射l器针头来回吸取3-4次，以破坏基因组dna，从而避免上述情况的出现。

8. 4°c 12000 g, 离心10 min。

9. 收集上清~1-2 mg总蛋白并放置于冰上使用。如果样品不立即使用，请将处理后的样品存放于-70°c条件下。