ARF1 蛋白常用指南

neweast biosciences arf6激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆抗l体和arf6特-兔多克l隆抗l体，该抗l体特-识别arf6-gtp，但不能识别arf6-gdp。 鉴于单克l隆抗l体对其抗原的高度亲和力，可以在短时间内进行激l活测定。 该测定法可提供-的结果，并具有一致的可重复性。

试剂准备

?1x测定/裂解缓冲液：短暂混合5x储备液，并在去离子水中稀释至1x。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mm pmsf，10 μg / ml亮肽素和10 μg / ml抑肽酶。

1.将细胞一块10厘米长的平板，约107个细胞培养至约80-90％汇合。根据需要用活化剂或抑制l剂-细胞。

2.吸出培养基，并用冰冷的pbs洗涤两次。

3.完全除去pbs洗涤液，然后向细胞中加入冰冷的1x分析/裂解缓冲液每10 cm组织培养板0.5-1 ml。

4.将培养板放在冰上10-20分钟。

5.用刮板将其从平板上取下。

6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。

7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果发生这种情况，可将裂解液通过27?号注l射器针头3-4次以剪切基因组dna。

8.通过离心10分钟在4°c下为12,000 x g清除裂解物。

9.收集上清液并将样品约1-2 mg的总蛋白存储在冰上以立即使用，或速冻并存储在-70°c以便将来使用。

悬浮细胞

1.培养细胞并根据需要用活化剂或抑制l剂-。

2.进行细胞计数，然后通过离心沉淀细胞。

3.吸出培养基，并用冰冷的pbs洗涤两次。

4.完全除去pbs洗涤液，然后向细胞沉淀物中加入冰冷的1x分析/裂解缓冲液每1 x 107个细胞0.5 – 1 ml。

5.通过重复移液裂解细胞。