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武汉纽斯特生物技术有限公司
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实验步骤
使用前将各种试剂取出放置30分钟,平衡至室温。所有标准品和样品必需设置平行对照实验。
快速加入试剂至样品中,立即漩涡震荡2秒混匀。
1. 依据实验键盘纸决定酶标条的使用量,将剩余的酶标条连同干燥剂一起放回密封塑料袋,密封,4℃保存。
2. 移取50μl中和液至各个微孔中,除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。
3. 移取100μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔和b0孔(0 pmol/ml camp标准品)。
4. 移取100μl camp标准品至相应的孔。
5. 移取100μl样品至相应的孔。
6. 移取50μl 0.1m hcl至nsb(非特异结合)孔。7. 移取50μl 偶联酶至各孔中,除了ta(全活性)孔和blank(空白)孔。
8. 移取50μl 抗l体工作液至各孔中,除了ta(全活性)孔、blank(空白)孔和nsb(非特异结合)孔。
9. 将酶标孔置于孔板振动器上,250~500rpm,室温孵育2小时。
10. 在吸水纸上拍干微孔内溶液,加洗涤液400μl每孔洗3次,每次需拍干。
11. 后一次洗涤,清空各微孔,在干净的无尘吸水纸上轻巧酶标板数次,以-没有洗涤液残留。
12. 加5μl 偶联酶至ta(全活性)孔。
13. 每孔200μl显色底物溶液,于室温静置5~30分钟。显色底物a和b需在临用前15分钟内等体积混合,并避光放置。
14. 每孔加入50μl终止液。终止后立即读数。
15. 清除酶标l仪blank(空白)孔值,读取450nm处的光密度值,在570nm至590nm之间有修正。如果酶标l仪不能自动清除blank(空白)孔值,那么手动扣除每个读数的blank(空白)孔光密度值。
武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd,系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio-于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
标准品制备
用1.0 ml通用稀释液重新配制标准溶液,在室内保存10分钟
温度,轻轻摇动不要起泡。标准品在原料中的浓度
溶液为20 ng/ml。请准备7支含有0.5 ml通用稀释剂的试管
根据下图制作一个双稀释系列。混合每根管子
在下一次转移之前检查。设置7点稀释标准,如20 ng/ml、10 ng/ml、5 ng/ml、2.5 ng/ml、1.25 ng/ml、0.62 ng/ml、0.31 ng/ml,zui后一根ep管
采用通用稀释剂,空白值为0 ng/ml。
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